動(dòng)物或人胚胎單細(xì)胞取材方法
（1）在受精后第三天，用機(jī)械法對(duì)胚胎活檢,胚胎處于5-10細(xì)胞狀態(tài),這個(gè)階段的活檢，后囊胚形成率最高。
（2）每個(gè)胚胎取1-3個(gè)細(xì)胞。對(duì)于5細(xì)胞胚胎，只取1個(gè)細(xì)胞；6-10細(xì)胞胚胎通常取2個(gè)細(xì)胞;對(duì)于10細(xì)胞胚胎可以取3個(gè)。
（3）活檢完成后胚胎放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
（4）第二日FISH結(jié)果出來后,將染色體正�；蚱胶庖孜慌咛ヒ浦踩雽m腔,對(duì)于人，第14天測(cè)定血HCG、21天做B超以檢查是否妊娠。對(duì)于動(dòng)物，繼續(xù)觀察。
（5）細(xì)胞從胚胎后先經(jīng)單細(xì)胞處理液A洗滌2次,吸置硅化玻片上,在相差顯微鏡下用PBS或0.075M KCl低滲處理1分鐘,立即滴加10-20µl單細(xì)胞處理液B讓其裂解3-5分鐘左右,此時(shí)，細(xì)胞漿完全去除。裂解后將玻片置37℃平板上,1%甲醛或卡氏固定5分鐘,70%、90%及100%梯度乙醇脫水各5分鐘。
卵裂球單細(xì)胞取材方法
（1）劃圈：用鉆石筆在玻片背面劃一個(gè)圓圈或三角。
（2）準(zhǔn)備巴氏管，用它吸取胚胎及卵裂球。
（3）制滴：在皿內(nèi)制備2個(gè)液滴、1個(gè)PBS液，1個(gè)液滴0.01HCl/0.05 Triton。
（4）低滲：將胚胎移入低滲液滴中，換內(nèi)徑吸管吹吸胚胎，使卵裂球分散。將卵裂球移至另一個(gè)低滲液滴中（0.075MKCl），靜置1-5分鐘。
（6）卵裂球固定：用內(nèi)徑吸管將低滲液滴中的卵裂球移至玻片的圓圈內(nèi)，液體自然蒸發(fā)過程中，在倒置顯微鏡下觀察胞膜破裂、胞質(zhì)散開、胞核顯露，用管尖觸動(dòng)液體有助于分離核及溶解胞質(zhì)。待液干燥后，在小圓圈內(nèi)滴加0.1%甲醛溶液或卡氏固定液，去除殘留胞漿。干燥備用。
（7）細(xì)胞定位：固定液完全干燥后，將其放在顯微鏡下找到細(xì)胞核，記錄坐標(biāo)。
單細(xì)胞FISH步驟過程
（1）變性：加入約20mlDNA變性液到玻片盒，水浴加熱至77±2℃，輕輕將玻片放入玻片盒中，77±2℃變性5min，取出后馬上依次放入預(yù)冷的75%、85%、100%乙醇各2min，晾干。注意：必須等玻片的雜交區(qū)域完全干燥，再滴加探針。
以下步驟，注意避光
（2）探針準(zhǔn)備
按每張片子6-10μl探針，根據(jù)片子數(shù)量N，微量移液器取6×N μl探針至0.2ml PCR管，探針94℃變性4min，37℃平衡2min�？捎肞CR儀變性。
（3）雜交
平衡后的探針滴加在標(biāo)本上，蓋蓋玻片，放入濕盒中，37℃-42℃雜交過夜（可以使用雜交儀或者濕盒放在干燥箱）。
Ø 提示：如果有雜交儀，可以共變性，簡(jiǎn)單便捷（外顯子生物提供三種雜交儀）。
（4）洗滌（共準(zhǔn)備3缸洗液）
玻片放入常溫洗液中，浸泡2-5min，使蓋玻片自動(dòng)脫落，將玻片移至已經(jīng)預(yù)熱的42℃的洗液，浸泡5min，再移至常溫洗液，浸泡5min.
（5）復(fù)染
滴加20μl DAPI，蓋蓋玻片，暗處?kù)o置15min，熒光顯微鏡觀察。
&需要試劑和耗材&
1，封片膠，0.075MKCl 100ml，PBS 1包/L，DAPI溶液1ml，（外顯子生物提供）
2，0.1%甲醛溶液（100ml），卡氏固定液（100ml，甲醇：冰醋酸=3：1），
3，單細(xì)胞處理液A（主成份：5% FBS/PBS）
4，單細(xì)胞處理液B（主成份：0.01N HCI/0.1%Tween 20/0.01ES）
5，探針：各種FISH探針（10Test），包含探針變性液。請(qǐng)聯(lián)系外顯子生物。
6，F(xiàn)ISH專用防脫玻片（外顯子生物）。
7，原位雜交儀：
濕潤(rùn)盒法原位雜交箱，2000元；
原位雜交儀：8片規(guī)格，4000元；原位雜交儀：12片，1.8萬元/臺(tái)。
8，其他：吹風(fēng)筒，加樣搶，滅菌槍頭，一般實(shí)驗(yàn)室都具備。
外顯子生物提供原位雜交的探針、試劑、設(shè)備、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，如果需要請(qǐng)聯(lián)系我們。
E-mail:focobio@126.com Tel:020-39352126 24小時(shí)反饋電話：180-1199-7127
