活細(xì)胞紅色熒光示蹤探針
(1)產(chǎn)品內(nèi)容:
名稱:活細(xì)胞染色示蹤-紅色,貨號:CM1912 規(guī)格:0.1ml
(2)檢測原理:
PKH26是一種脂溶性熒光染料,能插入細(xì)胞膜的脂質(zhì)分子牢固結(jié)合,用于標(biāo)記活細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)。在細(xì)胞分裂時(shí),PKH26熒光會平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞; 熒光強(qiáng)度會隨著分裂次數(shù)而遞減。PKH26標(biāo)記的細(xì)胞具有高穩(wěn)定性和低毒性,適用于體外和體內(nèi)長期示蹤實(shí)驗(yàn)。與CFSE類似(綠色熒光),PKH26紅色熒光。
(3)具體應(yīng)用:
流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的增殖分裂,細(xì)胞染色后的示蹤或追蹤,細(xì)胞的相互作用(綠色/紅色)。
(4)試劑盒特點(diǎn)與保存條件
Ø 所有試劑2-6℃保存; 試劑盒在有效期內(nèi)的穩(wěn)定。不要使用已經(jīng)過期的試劑;
Ø 用前,將試劑恢復(fù)至室溫(20-25℃),探針溶液必須混勻; 應(yīng)帶手套操作,使用新鮮二甲苯乙醇溶液
Ø 試劑PKH26濃度:2.5μM, 0.1ml, 1000×。
(4)檢測步驟
Ø 在室溫或37℃下,用PBS稀釋(1:1000比例)的染料,通過渦旋混勻即可。比如配制1ml溶液(利用PBS,1:1000稀釋原液)。
Ø 將其與離心沉淀的細(xì)胞一起,37℃孵育15-20分鐘,再在2-8℃放置15分鐘,離心細(xì)胞,PBS洗滌去除染料工作溶液,根據(jù)具體實(shí)驗(yàn),繼續(xù)培養(yǎng)或與其他細(xì)胞混合觀察或?qū)⑷旧募?xì)胞與其他細(xì)胞共培養(yǎng),避光。根據(jù)實(shí)際情況培養(yǎng)一段時(shí)間,一般不超過10天。
Ø 洗滌后,使用激發(fā)波長為 550nm,發(fā)射波長565nm(FL1或FITC通道)的流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
注意:使用原液;將任何剩余的溶液等分存于-20℃。避免反復(fù)凍融循環(huán),避免光照。
活細(xì)胞綠色熒光示蹤探針
(1)產(chǎn)品內(nèi)容:
名稱:活細(xì)胞染色液示蹤或分裂增殖探針,貨號:CM1911 規(guī)格:0.1ml
(2)檢測原理:
活細(xì)胞熒光示蹤探針CFSE,可以應(yīng)用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測熒光染色,分析異質(zhì)細(xì)胞群的有力工具。在所有現(xiàn)有的熒光染料中,CFSE是非熒光分子,其擴(kuò)散到細(xì)胞中并被細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光產(chǎn)物。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細(xì)胞膜和活性酯酶活性的細(xì)胞中產(chǎn)生,而死細(xì)胞不被染色。能追蹤細(xì)胞的去向和分裂,其熒光被檢測的時(shí)間大約持續(xù)10-12天左右,熒光強(qiáng)度隨細(xì)胞分裂而減少。
(3)具體應(yīng)用:
流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的增殖分裂,細(xì)胞染色后的示蹤或追蹤。
(4)試劑盒特點(diǎn)與保存條件
Ø 所有試劑2-6℃保存; 試劑盒在有效期內(nèi)的穩(wěn)定。不要使用已經(jīng)過期的試劑;
Ø 用前,將試劑恢復(fù)至室溫(20-25℃),探針溶液必須混勻; 應(yīng)帶手套操作,使用新鮮二甲苯乙醇溶液
Ø 試劑CFSE濃度,:2.5μM, 0.1ml, 1000X。
(5)檢測步驟
Ø 在室溫或37℃下,用PBS稀釋(1:1000比例)的染料,通過渦旋混勻即可。比如配制1ml溶液(利用PBS,1:1000稀釋原液)。
Ø 將其與細(xì)胞一起孵育10到30分鐘,PBS洗滌去除染料工作溶液,根據(jù)具體實(shí)驗(yàn),與其他細(xì)胞混合觀察,或者,將染色的細(xì)胞與其他細(xì)胞共培養(yǎng),避光。根據(jù)實(shí)際情況培養(yǎng)一段時(shí)間,一般不超過10天。
Ø 洗滌后,使用激發(fā)波長為 490左右(FL1或FITC通道)的流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
注意:使用原液;將任何剩余的溶液等分存于-20℃。避免反復(fù)凍融循環(huán),避免光照。
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